熒光光度測(cè)定法
● 在熒光測(cè)定結(jié)果中,熒光的強(qiáng)度(F)與儀器測(cè)得吸收的激發(fā)光束的fu射能量成正比,其公式如下:
● 其中,常數(shù)K'會(huì)因熒光測(cè)定器、光析管、熒光物質(zhì)種
類、溶劑、溫度等因素影響而有不同的量子效率。利用藍(lán)伯.比耳定律將熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度c之間的
熒光光度計(jì)的儀器架構(gòu),依其結(jié)構(gòu)組成分別有光源、激發(fā)光波長(zhǎng)選擇器、試樣區(qū)、熒光波長(zhǎng)選擇器、
偵測(cè)器與數(shù)據(jù)記錄器
● 光源
● 激發(fā)光波長(zhǎng)與熒光波長(zhǎng)選擇器
● 樣品分析區(qū)
● 偵測(cè)器
光源
▪ 由公式(4)中可明顯看出,熒光強(qiáng)度F與光源功率I0成正比,因此,熒光光度測(cè)定法所使用的吸收光源
應(yīng)較鎢絲燈或氘燈更強(qiáng)。目前最常使用的光源有低壓汞蒸氣燈(mercury lamp)與高壓氙燈(xenonlamp)。
低壓汞蒸氣燈可于254、302、313、546、578與773 nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生很強(qiáng)的光譜,由于熒光物
質(zhì)可藉由不同的波長(zhǎng)激發(fā)出不同的熒光,
因此通常至少有一條汞燈譜線會(huì)適合;而高壓氙燈則需要強(qiáng)
大的電源供應(yīng)器以產(chǎn)生在15~30 V時(shí)有5~20 A的直流電流,其連續(xù)光譜可提供在300~1,300 nm之波長(zhǎng)范圍。