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使用熒光顯微鏡觀(guān)察記數(shù)器玻片上的細(xì)胞

信息分類(lèi)：生命科學(xué)資訊　　　　作者:YIYI發(fā)布　

分割線(xiàn)

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使用熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)菌記數(shù)器玻片

內(nèi)容分析如下
 （樣品準(zhǔn)備）將樣品菌液取出后，以 10,000 x g 離心5分鐘，加入預(yù)先準(zhǔn)備的稀釋染液,
　
（染色原理）而稀釋染液的備制是先將染劑套組內(nèi)的兩種核酸染劑，利用兩染劑對(duì)細(xì)胞膜的穿透能力不同來(lái)區(qū)分活菌或死菌，
其中SYTO 9能穿透完整或受傷的細(xì)胞膜進(jìn)行核酸的標(biāo)記 ，而propidium iodide 僅能穿透受傷的細(xì)胞膜，且會(huì)與SYTO 9競(jìng)爭(zhēng)核酸標(biāo)記的位置，
　
（染色結(jié)果）使死菌或受傷的菌體染成熒光紅色；活菌則呈現(xiàn)熒光綠色。
　
（染色步驟）將SYTO 9 和 propidium iodide 做等倍體積混合，再取 3 μl 
混合染劑至1ml以0.2 μm濾膜過(guò)濾之無(wú)菌的 0.5% NaCl 鹽水溶液稀釋。當(dāng)菌體在黑暗操作染色處理30分鐘后，
　
（觀(guān)察計(jì)數(shù)）取菌液置于細(xì)菌記數(shù)器玻片上，至少取五個(gè)以上視野使用熒光顯微鏡觀(guān)察照相，
細(xì)菌記數(shù)器玻片深度為0.02 mm乘上一視野的表面積求得菌液的體積，再換算計(jì)數(shù)成每毫升菌液中的總活菌數(shù)目。

如何計(jì)數(shù)活菌數(shù)？取出樣品菌液后，離心5分鐘（10000xg）（取菌體？菌液？），在黑暗中加稀釋染液30min，
至于記數(shù)器玻片上，并取5個(gè)以上進(jìn)行熒光顯微鏡照相，最后0.2nm野表面積＝菌液體積，再計(jì)算總菌菌數(shù)/菌液（ml），
其中稀釋染劑利用SYTO9測(cè)活菌，呈熒光綠色，propidium iodide測(cè)死菌或受傷的菌，呈熒光紅。
本文由出自上海光學(xué)儀器廠(chǎng)，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明
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