我們在觀察或者產(chǎn)生熒光圖像時,一個主要問題是離焦區(qū)域的樣品呈現(xiàn)為物
體上的閃鑲點(diǎn),從而大大降低了信噪比。
而且,在成像過程中. 整個樣品被高強(qiáng)度的激發(fā)光照射,這樣可能會使熒光
劑光致氧化( 也即光致漂白) 。光學(xué)掃描顯微鏡可以減少這些因素的影響,它允
許在非常高分辨力的情況下觀察樣品,并且對熒光劑只有很低的光致氧化。
光學(xué)掃描顯微鏡逐點(diǎn)照明物體,用聚焦光束( 激光光源) 以X-Y 姍格式很快
地掃描物體。這種柵格式通過重復(fù)轉(zhuǎn)動光束偏轉(zhuǎn)振鏡裝置來實現(xiàn),即光斑點(diǎn)掃過
物體. 然后用光電倍增管探測系統(tǒng).
柵格逐點(diǎn)產(chǎn)生圖像. 所得圖像的強(qiáng)度信息被數(shù)字化并且存在電腦里以產(chǎn)生橄
個掃描區(qū)域的圖像. 掃描顯做術(shù)的分辨力受激光束的聚焦光斑大小限制,它接近
于所用波長的衍射極限。
另外一種掃描顯微術(shù)是NipKow盤顯微術(shù)( 也即串聯(lián)掃描顯微術(shù)) 。和上述的
點(diǎn)掃描技術(shù)不同.Nipkow 盤顯微術(shù)通過旋轉(zhuǎn)一個打了許多中心對稱孔的非透明盤
來多點(diǎn)照明樣品。通過旋轉(zhuǎn)這個盤. 整個樣品區(qū)域能被高速照明,實現(xiàn)實時成像
或者視頻速率成像。