細(xì)胞懸浮液分析適合使用倒置型設(shè)計(jì)
顯微鏡
在操作中,蓋玻片放在方格上,一滴細(xì)胞懸浮液通過(guò)巴斯德滅菌
管加到蓋玻片的邊緣,毛細(xì)管作用使液體推入并充斥腔中,如果蓋
玻片被沖撞或擾亂,針導(dǎo)致太多的液體進(jìn)入箱中,建議重新開(kāi)始。
蓋玻片的重量不足以從方格中放置過(guò)多的液體,作為一初始步驟使
用低倍物鏡以固定一干、空腔的方格中,并注意顯微鏡裝置以使樣
品被裝載之后腔室返回到同樣的位置。“中等”方形是雙線(xiàn)(有時(shí)
是三線(xiàn))的,這有助于它們的定位。方形數(shù)及欲統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞數(shù)取決
于樣品的濃度。如果可能,至少應(yīng)該統(tǒng)計(jì)100個(gè)細(xì)胞,至少給予三
位數(shù)的數(shù)。足夠的長(zhǎng)方形、廣泛的分布以充分代表所有的方格。
Levy-Hausser有兩個(gè)方格,每個(gè)上的細(xì)胞應(yīng)該被計(jì)數(shù),為了達(dá)到最
高的精確度,腔應(yīng)裝載多次,采用使細(xì)胞定位在線(xiàn)上的常規(guī)方法,
接觸被觀察方塊的頂邊界或右邊的細(xì)胞被包括在視野中,而接觸在
底端或左邊界的細(xì)胞被排除。對(duì)酵母,當(dāng)菌落形成單位數(shù)達(dá)到要求
時(shí),單個(gè)或發(fā)芽細(xì)胞同樣被計(jì)作一個(gè)單位;對(duì)細(xì)菌,一串細(xì)胞被認(rèn)
為是一個(gè)菌落形成單位,兩種情況下,需要估計(jì)生物量而不是菌落
形成單位;對(duì)酵母。人們應(yīng)估計(jì)發(fā)芽細(xì)胞是一個(gè)還是兩個(gè)單位,或
是兩者之間;對(duì)細(xì)菌,以單個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)估計(jì)細(xì)菌鏈的大致比例
,應(yīng)連續(xù)的仔細(xì)地記錄下觀察與猜測(cè)。